生物发酵罐是指从工程菌到工程细胞的大规模培养,一直到产品的分离和纯化的过程;其中生物发酵罐作为设备是化工工程的一个重要分支,它涉及到洁净流体的输送与混合,热量的传递,物质的传递等一系列化工原理和过程。
在发酵过程中,无论是悬浮培养还是采用微载体培养,既要保持一个无污染的纯种培养环境又要充分保证培养过程中氧的供给。不管使用的是机械搅拌还是气升式搅拌,都要是罐内的流体充分均匀混合,既要保证“传热”“传质”的顺利进行,又不损伤娇嫩的工程菌和工程细胞。
生物发酵罐指工业上用来进行微生物发酵的装置,其主体一般为用不锈钢板制成的主式圆筒,其容积在1立方米至数百立方米。发酵罐能耐受蒸汽灭菌、有一定操作弹性、内部附件尽量减少(避免死角)、物料与能量传递性能强,并可进行一定调节以便于清洗、减少污染,适合于多种产品的生产以及减少能量消耗。
生物发酵罐液体菌种替代固体菌种已经是大势所趋,现在越来越多的工厂开始使用液体菌种进行生产,虽然液体菌种各项生产指标都优于固体菌种,但是液体菌种容易染菌的特性是各大工厂头疼的事情。
液体菌种接种前一定要经过严格的检测才能够使用,但是更重要的是一旦发酵罐出现染菌,一定要尽快分析出染菌的原因,并加以解决。要分析发酵罐染菌的原因,我们首先得了解每一环节出现染菌的现象是什么,当出现染菌时,我们就能知道是哪个环节出问题了。
一、大型发酵罐灭菌
生物发酵罐不*引起的染菌会在2-3天内表现出来,其表现是培养液逐渐变得浑浊,菌球形成和生长变慢,不同细菌从排气味道上表现的程度有所不同,必须要注意的是如果培养的是低温品种,如金针菇,有表现的时间会延后,甚至到接种前从宏观上也没有明显的表现,只有通过检测才能确定已经感染细菌了。
引起发酵罐灭菌不*的原因主要是在灭菌锅发生的,而单体罐只要在灭菌过程的操作上。
解决办法:灭菌锅发酵罐,检查灭菌锅程序、管路、电磁阀(气动阀)、温度传感器、压力传感器等。单体发酵罐,检查冷空气是否排净、管路灭菌是否达标等。经过排查还不能解决,就需要适当增加灭菌时间或者灭菌温度。
二、大型发酵罐冷却
冷却过程引起染菌主要是因为冷却过程到压力"0"以前没有及时给发酵罐进气,造成负压,虽然管路都安装有单向阀,但是要知道单向阀不是的,而且单向阀使用时间久了出现故障的可能性很高。一般因为冷却引起的染菌几率不高,染菌表现出来的时间比灭菌不*引起的染菌要晚一些。
解决办法:生物发酵罐冷却时安排专人负责,避免出现负压的情况,加强发酵罐管件的日常检查维护。
三、大型发酵罐气源
气源引起发酵罐染菌表现出来的时期不确定,没有规律,同时气源带菌的轻重对染菌表现也有轻重之分。特别是气源进水引起的影响大,气源引起染菌有一个大特点是不同天数的发酵罐同时表现染菌。
解决办法:每天或者定期对无菌空气质量进行检测,加强无菌空气系统设备的巡检工作。气源长时间中断也会对液体菌种生长造成影响,但一般不会引起染菌。
四、大型发酵罐接种
大型发酵罐接种的过程是罐体开放与外界连通的过程,是危险的环节,接种引起的染菌表现严重时会很快,在1-2天就有可能表现出来,主要是人员操作不当所引起,食用菌层流罩净化效果下降也会引起染菌。
解决办法:加强接种人员的操作技能,要制定出操作规程;定期检查接种层流罩的净化效果,必要时每天对层流罩进行平板沉降检测。
五、大型发酵罐三角瓶菌种
三角瓶菌种不纯会直接导致发酵罐染菌,表现的时期也很早,快天就会出现剧烈的表现,这种情况出现的几率不是很大,但是也要对三角瓶菌种的纯度给予足够的重视,一个合格的液体菌种技术员不单是发酵罐做的好,制作试管母种和三角瓶的水平也很重要。
解决办法:重视和加强试管母种、三角瓶菌种制作水平,做好标准,并且要执行,如果对三角瓶菌种没有把握,可以将接种后的三角瓶进行空培养。
另外,生物发酵罐发酵的系统设备不合理也会染菌,例如蒸汽系统、无菌空气系统、物料消毒系统、冷水系统等。蒸汽的温度高低、压力大小、蒸汽中含冷凝水量会影响蒸汽的质量,由于湿饱和蒸汽中冷凝水含量大,蒸汽温度低、压力波动大,可能造成灭菌温度时间达不到杂菌的致死时间和致死温度而造成发酵染菌。