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多元醇类冻干保护剂包括甘油、甘露醇、山梨糖醇、肌醇、木糖醇、叔丁醇、侧金盏花醇等,这一类冻干保护剂是比较常用较为普遍的冻干保护剂。以甘油作为冻干保护剂来介绍一下在蛋白质冻干中的作用。甘油具有良好的渗透能力,可以进入细胞内部和胞内大分子形成氢键以取代干燥脱除的水分,从而维持蛋白质、碳水化合物及脂肪等大分子活性物质的原有结构。此外,甘油还可以起到降低细胞脱水皱缩和缓解复水肿胀的效果。另外醇和糖类相似均具有醇和糖类羟基官能团,均能产生“优先水化作用”以及改变体系的玻璃态转变温度等,...
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二糖又名双糖,双糖是碳水化合物的一种。它是由两个单糖分子经缩合反应除去一个水分子而成的糖。例如乳糖由葡萄糖和半乳糖组成,蔗糖由葡萄糖和果糖组成,麦芽糖由两个葡萄糖组成等。二糖作为常用的冻干保护剂,能够有效增加蛋白冻干稳定性,但是用它们作保护剂得到的无定形蛋白冻干固体具有较低的Tg,对储存过程中的高温和高湿条件耐受较差。大分子量糖能够增加冻干后固体的Tg,增加冻干后稳定性,但是对于低浓度蛋白活性保护作用不理想。例如蔗糖对蛋白质具有保护作用,葡聚糖在冷冻和干燥过程中不能防止蛋白质...
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聚合物又称加聚物。由一种单体经聚合(加聚)反应而成的产物。分子具有重复的结构单位。包括晶态结构、非晶态结构、取向态结构以及织态结构。聚合物包括聚乙二醇、PVP、明胶、聚乙烯亚胺等。聚合物常用作为蛋白质的冷冻保护剂,通常聚合物的稳定作用取决于聚合物的多重性质,如优先从蛋白质表面析出、表面活性、使蛋白质溶液私度升高从而阻止其他小分子(如糖及多轻基化合物)的结晶、抑制冷冻过程中pH值的剧烈变化等。不同聚合度及浓度的聚合物所提供的保护作用不同,如聚合度大的PvP有着较高的玻璃化温度,...
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氨基酸是含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称。目前发现的天然氨基酸就有300多种,基本氨基酸也有二十个品钟。氨基酸应用于食品行业、医药行业、化妆品行业等。氨基酸是常见的蛋白质保护剂之一。在冷冻过程中,低浓度的甘氨酸可通过抑制10或100mmol/L磷酸缓冲盐结晶所致pH值的改变而阻止蛋白质药物变性。无定型甘氨酸可阻止冻干过程中重组人生长激素的聚集;结晶型甘氨酸能升高成品的塌陷温度,阻止因塌陷而引起的蛋白质药物的破坏。常用的氨基酸类蛋白质保护剂有脯氨酸、谷氨酸钠、丙氨酸、甘氨酸...
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荧光PCR的探针法分为全基因组核酸探针、克隆探针、寡核苷酸探针、单链RNA探针、cDNA探针、蛋白质探针以及酶探针。带大家一起了解下寡核苷酸探针、cDNA探针、RNA探针的特点。寡核苷酸探针特异性较高,区别染色体上一个碱基的突变;由于其链短,分子量小,杂交时间较短(仅需1-2小时),可预测杂交条件,可直接利用DNA序列人工合成获得特异片段而无需分子克隆,获得探针相对容易。但是由于其链短致使标记率较低,也影响了检测的敏感性,仅能检出含很少的标本。cDNA探针以RNA为模板,用反...
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二甲基亚砜(DMSO)是一种有机化合物,常温下为无色无臭的透明液体,是一种吸湿性的可燃液体。具有高沸点、热稳定性好、与水混溶的特性。可作有机溶剂、反应介质和有机合成中间体。也可用作合成纤维的染色溶剂、去染剂、染色载体,以及回收乙炔、二氧化硫的吸收剂。二甲基亚砜是一种既溶于水又溶于有机溶剂。广泛用作溶剂和反应试剂,具有很高的选择抽提能力。二甲基亚砜是如何应用的呢?下面简单介绍下,DMSO是一种重要的渗透型细胞保护剂。培养液中DMSO浓度为10%时,细胞生长抑制率近100%;1‰...
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甲酰胺是一种化合物,无色透明液体,略有氨味,是合成医药、香料、染料等的原料,也可作为溶剂用于合成纤维的抽丝、塑料加工、木质酪素墨水的生产等。通过甲酸甲酯和氨的反应制备甲酰胺的方法。甲酰胺是可作为溶剂、有机合成原料、医药原料等的在工业上有用的物质。甲酰胺是被较早发现并应用的PCR冻干保护剂之一,能促进引物模板退火,能提高PCR反应的特异性。分享下荧光PCR试剂冻干的示例:(1)将荧光PCR扩增缓冲液、引物、探针、热启动Taq酶、UNG酶、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、...
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聚乙烯吡咯烷酮简称PVP,是一种非离子型高分子化合物,是N-乙烯基酰胺类聚合物中被研究得深、广泛的精细化学品品种。应用于医药、化妆品、食品等行业。可做粘合剂、增溶剂、分散或共研磨剂、活性成分稳定剂等。PVP按其平均分子量大小分为四级,用K值表示,K值实际上是与PVP水溶液的相对粘度有关的特征值,而粘度又是与高聚物分子量有关的物理量,一般K值越大,其粘度越大,粘接性越强。荧光PCR冻干时,PVP能够增强PCR产物生成量,其中PVP也能有效提高PCR效率和特异性。PVP作为PCR...
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